jembio 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 (TdT)說明書

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末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 (TdT)                 

末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 (TdT) 是一種不依賴模板的聚合酶，可催化將脫氧核糖核苷酸單磷酸從三磷酸添加到 DNA 的 3' 羥基末端。 

描述：

•  底物是：單鏈DNA、具有3'-羥基末端的雙鏈DNA 和寡脫氧核苷酸引物(1)。

• 用于使用核糖核苷酸 (2) 對 3'-末端進(jìn)行特定標(biāo)記。

• 用 [a-32P] 3'-脫氧核苷標(biāo)記 DNA 片段的 3'-末端 (3)。

• 將脫氧核糖核苷酸的均聚物尾部添加到載體或 cDNA (4,5)。

單位定義：一個(gè)單位定義為在 37°C 下 1 小時(shí)內(nèi)將 1 nmol dAMP 從 dATP 轉(zhuǎn)移到寡脫氧核糖核苷酸起始劑 p(dA)50 的 3'-OH 末端所需的酶量。 儲(chǔ)存條件：-20°C 儲(chǔ)存。 

儲(chǔ)存緩沖液：100 mM Tris-HCl（pH 7.2，22°C）、1 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油。 

檢測條件：40 mM 二甲胂酸鉀 (pH 7.2)、8 mM MgCl2、8.3 mM 磷酸鉀、0.33 mM ZnSO4、10 mg/ml 牛血清白蛋白、0.01 mM 寡脫氧核苷酸 p(dA)50 和 1 mM [a-32P]在 60 µl 的反應(yīng)體積中，在 37oC 下反應(yīng) 1 小時(shí)。 

質(zhì)量控制：所有制劑都經(jīng)過核酸內(nèi)切酶、核酸外切酶和非特異性 RNase 以及單鏈和雙鏈 DNase 活性的檢測。 

參考：1. Chang, LM 和 Bollum, FJ (1971) J. Biol。化學(xué) 246、909-916。2. Roychoudhury, R. 和 Kossel, H. (1971) Eur。J. 生物化學(xué)。22、310-320。3. Tu, CPD, 和 Cohen, SN (1980) Gene 10, 177-1834. Roychoudhury, R.、Jay, E. 和 Wu, R. (1976) Nucleic Acids Res。3, 863-877。5. Deng, G. 和 Wu, R. (1983) Methods Enzymol。100, 96-116。