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除了我們自己的實(shí)力,包括經(jīng)驗(yàn)豐富的專業(yè)科學(xué)家,技術(shù)人員和先進(jìn)的基礎(chǔ)設(shè)施,我們與其他三個(gè)研究小組合作,我們是印度班加羅爾的Microtest Innovations的主要合作伙伴之一。我們?cè)谏锛夹g(shù)和化學(xué)領(lǐng)域已有12年的歷史,我們的一些科學(xué)家擁有超過(guò)30年的經(jīng)驗(yàn)。
ScienTech KTS-01說(shuō)明書(shū)
PAP (Pyrophosphorolysis-activated polymerization)/ KlenTaq-S
PAP(焦磷酸解 -活化聚合)/ KlenTaq -S
PAP是一種*的DNA擴(kuò)增方法(Liu和Sommer:BioTechniques,29 [2000],1072-1080; Nucleic Acids Res,30 [2002],598-604),其中焦磷酸解 和聚合通過(guò)DNA聚合酶使用3連續(xù)偶聯(lián)。 '封閉的底漆。 焦磷酸解是DNA聚合的逆反應(yīng),其中在無(wú)機(jī)焦磷酸鹽存在下酶除去引物模板雙鏈體3'末端的封閉核苷酸(通常是雙脫氧)。在通過(guò)焦磷酸解作用除去封閉的核苷酸后,然后可以通過(guò)DNA聚合延長(zhǎng)活化的引物。
由于PAP 的高特異性(1 / 3x10 11) ,該過(guò)程正成為 在大量過(guò)量野生型等位基因存在下檢測(cè)稀有突變,大雜合缺失,基因重復(fù)等的有力工具(Liu et al:Biotechniques),40 [2006],661-668)。理論上,PAP可以檢測(cè)3× 10 11個(gè)野生型等位基因中的單個(gè)堿基突變。
PAP可以被用來(lái)作為一種替代或證實(shí)的實(shí)時(shí)PCR (Boon等人: Prenat DIAGN 27 [2007],932-937)
KlenTaq -S和PAP反應(yīng)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)KlenTaq -S是 PAP反應(yīng)中許多研究小組的合適的熱穩(wěn)定 Taq DNA聚合酶。
KlenTaq -S由該基因的5'缺失和F667Y(Tabor和Richardson)突變表達(dá),編碼Thermus aquaticus DNA聚合酶。反復(fù)暴露于98 0在PR1反應(yīng)C緩沖區(qū)的酶不顯示活性的任何顯著損失。
KlenTaq - S的濃度: 10U /μl
建議的PAP反應(yīng)條件(25μl ):
50 mM Tris-HCl,7.8,16 mM硫酸銨,3.5 mM 氯化鎂, 25μM,每種四種dNTP,每種引物0.1μM,5-200 ng 模板,90μM無(wú)機(jī)焦磷酸鹽(Na 4 PPi),2%二甲基亞砜(DMSO) ),2.5 U KlenTaq -S。
騎行條件:
95 0 Ç 為 1分鐘(變性),然后
94 0 C持續(xù)15秒
60 0 C持續(xù)30秒
64 0 C持續(xù)30秒
68 0 C 1分鐘
72 0 C持續(xù)1-2分鐘,共25-45個(gè)循環(huán)
提供緩沖液 ( 10X PR1):
500 毫米 的Tris-HCl,pH值7.8,160 mM的 ( NH 4)2 SO 4,35 毫的MgCl 2,1.5毫克/毫升BSA
訂購(gòu)信息:
訂貨號(hào) :KTS-01
數(shù)量: 100μl或1000 U /小瓶
價(jià)格: $ 200 /小瓶(1000 U)
運(yùn)費(fèi): 美國(guó)35美元(FedEx隔夜)