美國GRC公司：Glen Research Corp 創(chuàng)建于1987年，專注于為DNA和RNA寡核苷酸的化學(xué)合成，修飾，標(biāo)記和純化提供zui廣泛的亞磷酰胺和固體支持物，現(xiàn)已有近三十年的歷史，在低聚核苷酸及修飾、改性領(lǐng)域一直處于地位。

Glenresearch BACKBONE MODIFICATION

骨干修改 

甲基膦酰胺

甲基膦酰胺可以按照常規(guī)的CE亞磷酰胺方案用于DNA合成儀中，以產(chǎn)生含有一個(gè)或多個(gè)甲基膦酸酯鍵的寡核苷酸。但是，脫保護(hù)和純化技術(shù)不同，程序說明包含在技術(shù)公告中。我們還提供具有乙?；Ｗo(hù)的dC單體。¹ 在裂解步驟中用氫氧化銨除去該保護(hù)基團(tuán)，在脫保護(hù)步驟中使用乙二胺中的乙二胺消除dC位點(diǎn)的修飾。

參考

1. MP Reddy，F(xiàn)。Farooqui和NB Hanna，Tetrahedron Lett。，1996,37,8691-8694。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

PACE亞磷酰胺

膦酰基乙酸酯（PACE）修飾的寡核苷酸作為生物修飾劑在各種研究應(yīng)用中顯示出巨大的潛力。PACE單體是膦酰基羧酸酯單體家族的一部分。單體可以容易地?fù)饺霃?fù)雜的寡核苷酸中，并且與多種其他糖或異堿基修飾相容。PACE DNA可以通過羧酸官能團(tuán)綴合。已顯示它們?cè)趕iRNA雙鏈體中具有活性，并且當(dāng)與硫代磷酸酯結(jié)合時(shí)加速RNase H-1的初始切割速率。然而，迄今為止有趣的觀察結(jié)果是它們?cè)谂囵B(yǎng)細(xì)胞的滲透方面表現(xiàn)出的增強(qiáng)。

膦?；宜猁}*溶于乙腈，推薦濃度為0.1M，與標(biāo)準(zhǔn)DNA合成儀兼容。使用標(biāo)準(zhǔn)方案時(shí)，建議使用1H-四唑的33.3分鐘偶聯(lián)時(shí)間。我們上提供了一種改進(jìn)的用于AB儀器的LV循環(huán)，可將1H-Tetrazole的偶聯(lián)時(shí)間縮短至15分鐘。氧化必須先于合成循環(huán)中的封端。氧化試劑取決于合成的類型。對(duì)于*修飾的寡核苷酸，我們推薦使用非水氧化劑樟腦磺酰氯氮雜環(huán)丙烷（CSO）作為0.1M溶液。對(duì)于混合磷酸二酯和膦?；宜狨バ揎椀墓押塑账幔扑]使用0.5M CSO溶液。低水氧化劑，40-4032，雖然據(jù)報(bào)道這可以導(dǎo)致少量膦?；宜狨マD(zhuǎn)化為磷酸二酯，但它是另一種氧化劑。我們還建議使用Cap Mix B和DMAP（40-4020）代替含有1-甲基咪唑的標(biāo)準(zhǔn)Cap Mix B.

用于切割和去保護(hù)的標(biāo)準(zhǔn)方案需要兩步法，使用1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯（DBU）進(jìn)行預(yù)處理，隨后使用甲胺進(jìn)行切割。DBU用于使二甲基氰基乙基（DMCE）保護(hù)基脫保護(hù)并在脫保護(hù)過程中防止堿的烷基化。建議在水中用40％甲胺裂解，并且當(dāng)使用AMA脫保護(hù)時(shí)我們也有良好的結(jié)果。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

這些產(chǎn)品受美國6,693,187和7,067,641，正在申請(qǐng)和Lievre Cornu擁有的外國同行的保護(hù)。購買所有或任何這些產(chǎn)品包括僅在僅用于研究的寡核苷酸的制造中使用該產(chǎn)品的有限許可，并且其使用未被授權(quán)也不用于診斷或治療用途。

其他儀器類型

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窗體頂端

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甲基亞磷酰胺

多年來，Glen Research除了β-氰乙基（CE）亞磷酰胺之外還提供了甲基亞磷酰胺，因?yàn)樵谶@種情況下，不太活潑的氰乙基不是優(yōu)勢(shì)。我們的一些客戶，可能記得用甲苯酚專門去除甲基，試圖使用這些單體來制備有趣的，不帶電的和核酸酶抗性的甲基磷酸三酯鍵。不幸的是，這種連接對(duì)氫氧化銨是不穩(wěn)定的，并且形成了規(guī)則的磷酸二酯鍵（以及少量的斷鏈）。我們?yōu)榇藨?yīng)用提供UltraMild甲基亞磷酰胺。由這些單體制備的寡聚物可以用碳酸鉀在甲醇中脫保護(hù)，以產(chǎn)生甲基磷酸三酯鍵。由于這些聯(lián)系是非對(duì)映的和不帶電荷的，寡頭可能很難處理。因此，使用這些單體以及常規(guī)的UltraMild CE亞磷酰胺可能會(huì)產(chǎn)生嵌合體。如果寡核苷酸中包含許多dG殘基，我們建議使用苯氧乙酸酐（Pac₂ O）在Cap A.此修改消除了異丙基苯氧基（IPR-PAC）保護(hù)基的dG的用乙酸從乙酸酐封端混合物的交換的可能性。

其他儀器類型

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ULTRAMILD SOLVENTS / REAGENTS

H-膦酸酯單體

通過HPLC分析Glen Research H-膦酸酯并進(jìn)行合成測(cè)試。H-膦酸鹽尤其可用于制備通過亞磷酰胺化學(xué)無法獲得的修飾的核苷酸間鍵。常用的應(yīng)用是放射性標(biāo)記的硫代磷酸酯的制備，因?yàn)榱蚧磻?yīng)在合成器外進(jìn)行。這些單體包裝在ABI型小瓶中（見注釋框）。

其他儀器類型

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H-膦酸鹽試劑

我們的H-膦酸鹽溶劑和試劑已經(jīng)停產(chǎn)。使用高純度產(chǎn)品和下面所示的配方可以容易地制備H-膦酸鹽試劑。

1-金剛烷碳酰lu可購自Aldrich，目錄號(hào)117722.稀釋至0.1M。
?（單體和封端劑的活化劑）

乙腈/吡啶（50:50），無水
（單體稀釋劑）

乙腈/吡啶（95：5），無水
（活化劑稀釋劑）

1％乙腈/吡啶中的異丙基亞磷酸酯（50:50）
（封端試劑）

乙腈/吡啶（50:50）
（中和劑和洗滌溶劑）

4％I ₂的吡啶/ H 2 O / THF（10:10:80）THF / H 2 O / TEA（80:10:10）
（兩種試劑都是H-膦酸酯鍵氧化所必需的）

縮寫

Ac ₂ O =乙酸酐
CE =氰乙基
CPG =受控孔徑玻璃
DCA =二氯yi酸
DCM =二氯甲烷
DMAP =二甲基氨基吡啶
dmf =二甲基甲脒
DMT = 4,4'-二甲氧基三苯甲基
I ₂ =碘
iPr =異丙基
MeIm = 1-甲基咪唑
μm=微摩爾（s）
nm =納摩爾（s）
Pac =苯氧基
乙?；鵓hOAc =苯氧基乙?；?/span>
TCA =三氯yi酸
THF =四氫呋喃

THIOPHOSPHORAMIDITES

在DNA磷酸二酯鍵中用硫原子取代兩個(gè)非橋接氧原子產(chǎn)生二硫代磷酸酯（PS2）鍵。¹與天然DNA一樣，二硫代磷酸酯鍵在磷上是非手性的。該類似物*抵抗核酸酶降解，并與DNA和RNA形成復(fù)合物，穩(wěn)定性稍差。²此外，已發(fā)現(xiàn)PS2-ODNs與其磷酸二酯類似物^2-6結(jié)合的蛋白質(zhì)具有更高的親和力，這表明PS2-ODNs可能具有硫修飾的磷酸酯適體（硫代適體）^3,6-形式的額外效用。⁸用于治療和診斷應(yīng)用。

1. 硫代亞磷酰胺（ThioPAs）不溶于無水乙腈稀釋劑。相反，乙腈中的10％DCM（v / v）是所有四種硫代PA的理想稀釋劑，終的亞胺濃度為0.15M。
2. 在含有10％DCM的無水乙腈中，ThioPPA比正常DNA亞磷酰胺的穩(wěn)定性稍差; 然而，在室溫下溶解兩天后，所有四種硫代PA的偶聯(lián)效率都沒有降低。
3. 合成后，合成器上的thioPA瓶應(yīng)更換為含有乙腈稀釋劑的瓶子，合成器管線用乙腈沖洗。

固相合成PS2鍵的典型循環(huán)不同于合成正常磷酸鍵的標(biāo)準(zhǔn)循環(huán)。偶合后，然后用DDTT硫化所得的硫代亞磷酸三酯。硫化后進(jìn)行封端。

完成自動(dòng)合成后，使用含有20mM DTT的濃氨：乙醇（3：1，v：v）混合物在55℃下進(jìn)行脫保護(hù)15-16小時(shí)。

參考

1. J. Nielsen，WKD Brill和MH Caruthers，Tetrahedron Letters，1988,29,2911-2914。
2. L.Cummins，D.Graff，G.Beaton，WSMarshall，和MH Caruthers，Biochemistry，1996,35,8734-41。
3. X.Yang和DG Gorenstein，Curr Drug Targets，2004,5,705-15。
4. W .S。Marshall，和MH Caruthers，Science，1993,259,1564-70。
5. JL Tonkinson等，Antisense Research and Development，1994,4,269-278。
6. X.Yang等，Bioorg Med Chem Lett，1999,9,3357-62。
7. X.Yang等人，Ann NY Acad Sci，2006,1082,116-9。
8. X.Yang等，Nucleic Acids Res，2002,30，e132。

其他儀器類型

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硫化試劑

Glen Research的硫化試劑用于使用CE亞磷酰胺化學(xué)制備硫代磷酸酯鍵。每種試劑都具有以下屬性：

1. 可靠地溶解，使其可以安全地用于自動(dòng)合成器。
2. 反應(yīng)快速（30秒），使得該過程在小規(guī)模上方便，并且易于擴(kuò)大規(guī)模。
3. 過程是有效的，優(yōu)于96％的連接是硫代磷酸酯，其余是磷酸二酯。

訂購硫化劑（Beaucage Reagent）時(shí)，請(qǐng)同時(shí)訂購適合您儀器的硅烷化瓶。提供試劑訂單時(shí)，一瓶不收費(fèi)。

在用乙腈沖洗并干燥后，可以重復(fù)使用硅烷化瓶。額外的硅烷化瓶的價(jià)格如下所示。將試劑溶解在乙腈中，濃度為1g / 100mL。硫化試劑II（3 - （（二甲氨基亞甲基）氨基）-3H-1,2,4-二噻唑-3-硫酮，DDTT）具有Beaucage的所有性質(zhì)試劑在合成器中增加溶液穩(wěn)定性并提供強(qiáng)硫酸化RNA連接能力。硫化試劑II有粉末形式和穩(wěn)定的溶液。